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［摘
要］ 目的
探讨镀银染色法在一期梅毒实验室诊断中的意义。
方法 对生殖器溃疡患者经刮片取材后作镀银染色和暗视野镜检检测梅毒螺旋体（TP），同时对血清进行RPR和TPPA检测。
结果 146例患者中镀银染色法阳性检出率为39.7%，高于暗视野镜检阳性检出率的23.9%(P<0.001)。螺旋体经镀银染色后清晰易辨，特别是部分患者溃疡期较长或局部用药后的标本，仍有较好的检出率。
结论
镀银染色法是早期梅毒实验室诊断的一种比较有效的方法之一；对病期相对较长或局部用药的患者标本，镀银染色法检出率优于暗视野镜检。
［关键词］ 镀银染色法；暗视野镜检；梅毒螺旋体；一期梅毒
［中图分类号］
R 759.1
［文献标识码］ B
［文章编号］ 1001-7089(2004)12-0756-01
梅毒螺旋体（TP）侵入人体后，经2～4周的潜伏期，在侵入部位发生急性炎症反应称硬下疳。若能及时、正确地在溃疡处检测到病原体，则能达到早期诊断、早期治疗和切断传染源的目的。笔者用镀银染色的方法和暗视野镜检，检测了146例生殖器溃疡患者，结果报告如下。
1
资料和方法
1.1
临床资料 146例生殖器溃疡患者为本院2003年性病门诊病人，其中男134例，女12例；年龄18～72岁，平均44.9岁；病程3天~6周。男性溃疡主要见于阴茎体、龟头和冠状沟等部位；女性见于阴阜、大小阴唇等部位。
1．2 实验室检查
1.2.1
取材
无菌棉球擦去溃疡表面污物后，用钝刀轻轻刮溃疡面，稍等，有组织液渗出后，用洁净载玻片在溃疡面印片两张。一张镀银染色；另一张暗视野显微镜检查。
1.2.2
镀银染色 参照文献［1］对镀银染色法进行改良。第1液（固定）：1.5 ml冰醋酸+2.75 ml甲醛配至100 ml；第2液（媒染）：5 g单宁酸+1
ml酚配至100 ml；第3液（银氨）：1%硝酸银溶液中滴加稀释的氨水，至咖啡色浑浊恰好变清。
1.2.3
实验操作 镀银染色：①涂片的微热固定后，滴加第1液固定2 min，在中间更换一次第1液，流水冲洗。②加第2液媒染剂覆盖涂片1 min，在火焰上微加热至涂片冒蒸气，流水冲洗。③加第3液氨液覆盖涂片1 min，微加热。再次流水冲洗，干燥，加香柏油镜检：螺旋体被染成深褐色，呈螺旋状，有8～14个螺旋，两端尖细，层次清晰（图1）。暗视野检查见有典型形态和运动方式的螺旋体即为阳性。
1.2.4
血清学试验 患者同时抽血检测梅毒抗体，RPR和TPPA 按常规操作。
1. 3
资料分析 资料用EXCEL 2000录入，率的比较用配对卡方检验。
图1
梅毒螺旋体镀银染色油镜下形态
2
结果
146例生殖器溃疡患者中，80例RPR和TPPA抗体试验阳性，其中镀银染色58例TP阳性（39.73%），暗视野镜检35例TP阳性（23.97%）。这些患者的实验室结果与临床诊断相符合。在23例镀银染色阳性但暗视野镜检阴性的患者中，有15例患者溃疡损害超过2周，8例患者曾自用抗菌药物涂抹于患处。其余66例生殖器溃疡患者梅毒螺旋体镜检和抗体检测均为阴性。实验室检查结果见表1。
表1 80例RPR+TPPA阳性的生殖器溃疡两种方法检测结果 例
|
方法 |
暗视野镜检 |
| + |
- |
|
镀银染色 |
+ |
35 |
23 |
| - |
0 |
22 |
注：两种方法检测结果比较，χ2=21.04，P＜0.001
3
讨论
通常一期梅毒患者出现硬下疳后有1~2周的血清窗口期，此阶段的实验室诊断主要是依靠病原学检查。暗视野镜检是有效的方法之一，但在实际应用中受人员的操作技术和昂贵设备等限制；另外，因检测标本不能保留，不易开展实验质控。因此，寻找一种更为方便和实用的TP检查法，显得尤为必要。
本次研究结果显示：所有暗视野镜检阳性标本，镀银染色均显示阳性；即便23例暗视野镜检阴性标本，镀银染色也显示阳性，且这些标本也被血清试验证实。较长病程的硬下疳，免疫应答反应使螺旋体减少，是造成暗视野镜检阳性率低的原因之一；另外，局部用药影响了生存环境，螺旋体活力受限不能维持特有的运动方式或形态，在暗视野镜检时因不符合判断标准，造成假阴性。但镀银染色后仍可见到呈深褐色的TP。龚志锦等［2］和杨光河等［3］曾报道，镀银染色法在检测TP时，比暗视野镜检有更高的阳性率。22例镀银染色TP阴性但RPR和TPPA抗体试验阳性的生殖器溃疡患者，其血清抗体阳性，不能排除一期梅毒。
笔者结合自己的经验，将传统的镀银染色法进行适当改进，染色试剂在室温下保存1年以上不改变染色效果；操作简便易行，染色时间缩短为5 min；TP染成深褐色，与背景反差明显，经树胶封片后可长久地保存。
笔者认为镀银染色较暗视野镜检阳性率高，推广于临床常规检测将会有助发现早期梅毒。如果在基层医疗单位普遍开展，将会改善目前的公共卫生状况。
［ 参
考 文 献 ］
［1］
叶顺章.性传播疾病的实验室诊断［M］.北京:科学出版社,2001.30-32.
［2］
龚志锦,詹容洲.病理组织制片和染色技术［M］.上海:上海科学技术出版社，1994:224-228.
［3］
杨光河,程春林,吴枝香. 苍白螺旋体镀银染色检查在一期梅毒诊断中的应用［Ｊ］.临床皮肤科杂志,2003,32(5):257-528.
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