梅毒ELISA和TPPA两种试验方法的血清质量控制的体会-中国皮肤性病学杂志-检验技术

梅毒ELISA和TPPA两种试验方法的血清质量控制的体会
The Analysis of Two Test Ways of Serum Contol on Treponema Pallidum ELISA and TPPA

李韶深，刘春莉，刘琳
LI Shaosheng，LIU Chunli，LIU Lin

［摘要］目的 比较ELISA方法与TPPA方法检测梅毒抗体，提高弱阳性血清的检出率。

方法利用2003年卫生部下发的梅毒室间质控阳性血清0333，0335号进行稀释实验，预期达到ELISA试剂盒Cut off 临界值，并与TPPA方法进行比较。

结果 0333号血清经过10倍、20倍、40倍稀释后没有出现倍比稀释的效果，两种方法检测结果相同；0335号血清经过3倍、6倍、9倍稀释后，在6倍、9倍稀释的OD值都小于Cut off ，ELISA检测为阴性；而6倍稀释的血清TPPA检测为阳性。

结论应用ELISA方法检测梅毒抗体时，对于OD值处于临界值或小于临界值的血清标本应用TPPA方法进行复检。 

［关键词］梅毒抗体；ELISA；TPPA

［中图分类号］R 739.33;R 759.1

［文献标识码］B

［文章编号］1001-7089(2005)03-0183-01

在检测梅毒抗体时，笔者发现，有一些梅毒血清用ELISA方法检测与用TPPA方法检测结果有区别。为此，笔者做了下面的试验来进一步说明两者不同。

1材料和方法

1.1试剂与仪器TPPA方法选用日本富士公司的凝胶颗粒梅毒抗体检测试剂盒；ELISA方法选用北京吉比爱生物制品公司的双抗原夹心法试剂盒，试剂盒的检测临界值（Cut off）为=0.15，批号20030925。READER2010 酶标仪依据样品吸光度/Cut off（即S/CO值）判定结果，S/CO＞1为阳性，S/CO＜1为阴性；洗扳机FLUIDO产地均为澳大利亚。 

1.2血清试验标本选用2003年11月份卫生部下发的梅毒室间质控血清0333号，0335号。 

1.3方法2份质控血清TPPA，ELISA结果都是阳性，ELISA检测结果OD（样品吸光度）值分别为1.6和0.42，S/CO＞1。将两份血清进行稀释，预期找出在检测临界值或更小的吸光度值以便观察比较。理论上，将0333号血清（OD=1.6）稀释10倍即可以得到吸光度为0.16的底线值，本实验做了10倍、20倍、40倍的稀释，稀释后的吸光度理论值应为0.16，0.08，0.04。同样，对0335号标本（OD=0.42）也进行稀释，分别是3倍、6倍、9 倍，稀释后吸光度的理论值应为0.14，0.07，0.046。所用的稀释液是吸光度为0.014的阴性血清。将稀释好的血清分别作ELISA和TPPA试验，具体操作完全按试剂盒的要求进行。

2结果

0333号血清稀释后OD值没有得到理论上稀释的

比例，倍比稀释的效果也不明显，4个比例吸光度都＞1.0， S/CO＞1，稀释后的ELISA与TPPA结果相符都是阳性，结果见表1。 0335号血清稀释后，虽然没有出现理论上的比例，但倍比稀释的效果较明显，见表2。由此可见，在检测梅毒抗体时，〖CM(26*2〗ELISA的吸光度范围在0.10～0.15之间，就会出现假阴性结果。

表10333号质控血清ELISA与TPPA结果

原倍稀释		1∶10稀释	1∶20稀释	1∶40稀释
吸光度	1.60	1.535	1.508	1.382
S/CO	10.7	10.2	10.1	9.2
ELISA结果	+	+	+	+
TPPA结果	+	+	+	+

表20335号质控血清ELISA与TPPA结果

原倍稀释		1∶3稀释	1∶6稀释	1∶9稀释
吸光度	0.42	0.287	0.124	0.061
S/CO	2.81	1.91	0.82	0.40
ELISA结果	+	+	-	-
TPPA结果	+	+	+	-

3讨论

TPPA与TP-ELISA都是利用抗原与特异性抗体反应进行检测的，但试剂盒设计的原理是不同的。TPPA是将提纯的梅毒螺旋体特异性抗原包被在凝胶颗粒上，当抗原与血清中抗体发生特异性反应时就会出现颗粒凝集现象，凝集的强弱与抗体浓度成正相关。理论上，只要有特异的抗原抗体结合就会出现凝集反应，但结果报告与试验人员的观察力和经验有关。笔者的经验是：对不确定的结果应该用放大镜观察，特别要看边缘有无模糊、不实的现象，如果出现就应高度怀疑或重新复核实验，并且至少要在2人观察后才能出据报告。TPELISA试剂盒也包被了重组的梅毒螺旋体特异性抗原，通过颜色的反应，仪器可以判断实验结果，该试剂盒的Cut off为0.15，判定阳性标准为为样本的吸光度值＞0.15，即OD＞Cut off(S/CO＞1)，判定阴性的标准样本的吸光度值＜0.15，即OD＜Cut off(S/CO＜1)那么0~0.15之间的特别是OD值在0.10～0.15弱阳性的血清就会被漏检，这与毛爱玲^［1］报告的结果有相同之处。因此，对于出现OD值在Cut off临界值的阴性标本应该用TPPA或金标准FTAABS进行验证。另外，人工加入血清的量不准确或洗扳机洗板过程中每孔冲洗力度不均匀，酶标仪光路受污染等，都可能出现样品的OD值不准确。因此，应该加强操作人员的培训和定期进行仪器的校准。

［参考文献］

［1］毛爱玲，郭晓黎，聂晓勇.梅毒TPPA，ELISA两种试剂的比较［J］.中国卫生检验杂志，2003， 13:378.

［作者单位］天津市长征医院，天津300021
［作者简介］李韶深 (1965-)，天津市人，医学学士，副主任技师，主要从事微生物及性病实验室工作。

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